Cromatografía de pigmentos fotosintéticos

     Los pigmentos fotosintéticos son esenciales para la fotosíntesis. Sin una molécula que atrape la energía lumínica, no se puede llevar a cabo la fase lumínica. Si no se lleva a cabo la fase lumínica, no podría ocurrir el ciclo de Calvin. Sin ciclo de Calvin, no tendríamos glucosa. La clorofila es el pigmento fotosintético más importante. De hecho, en los fotosistemas de la membrana tilacoidal, hay un par de clorofilas especiales que canalizan la energía de la luz para energizar los electrones. No obstante, hay otros pigmentos contenidos en los cloroplastos: antocianina, carotenoide y xantofila. Estos reflejan largos de onda diferentes a la clorofila, la cual refleja el verde porque absorbe los demás. La antocianina refleja púrpura y rojo. El carotenoide refleja anaranjado, rojo y amarillo. La xantofila refleja amarillo. Cuando ves hojas de un color que no es verde, es porque tienen una gran concentración de otros pigmentos. Pues bien, agarra dos hojas de diferentes colores y hagamos una cromatografía. Dirás, cromatografía, ¿pero qué es eso? La cromatografía es un método químico de separación para la caracterización de mezclas complejas cuyo objetivo es separar los distintos componentes, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Tiene una fase estacionaria (papel) y una fase móvil (disolvente). ¿Estás listo?

Necesitaremos los siguientes materiales: 

- Hojas de cilantrillo o recao

- Hojas de repollo violeta

- Papel blanco de maquinilla

- Alcohol etílico o isopropílico con concentración de 70% o más

- Mortero

- Papel toalla

- Cuatro vasos transparentes

    En mi caso, realicé una tercera cromatografía con una hoja multicolores porque estaba curiosa en cuanto a su composición de pigmentos fotosintéticos. La colocaré en un vaso #3. Observa qué hermosura.

Ahora bien, este es el procedimiento a seguir. 

1. Limpia y prepara el área de laboratorio. Organiza los materiales. Te sugiero utilizar protección para los ojos y la ropa. El alcohol puede caer en el ojo y causar complicaciones. La ropa se puede manchar por los pigmentos y la mancha puede ser un poco difícil de remover.

2. En un vaso o mortero, vierte aproximadamente 30mL de alcohol etílico o isopropílico con concentración de 70% o más.

3. Añade las hojas verdes. Yo usé recao, pero cualquier hoja verde funcionará. 

4. Tritura las hojas en el alcohol hasta que éste se observe con color.

5. Cuidadosamente, filtra la mezcla vertiendo solamente el alcohol en un vaso transparente.

6. Repite el proceso con las hojas violeta. Yo usé repollo violeta, pero puedes usar cualquier hoja o flor cuyo color sea diferente a verde. 

7. En cada vaso, coloca un pedazo de papel cuadrado en el alcohol.

8. Deja los vasos en un área segura donde no puedan ser golpeados o derramados.

    Tras realizar el procedimiento debes tener dos vasos cuyo alcohol estará ligeramente teñido. Al cabo de unos minutos puedes comenzar a apreciar los pigmentos atravesando la fase estacionaria. 

    Puedes dejar la cromatografía de un día para otro, aunque varios minutos más tarde podrás apreciar la separación de pigmentos. Al día siguiente, remueve el papel y deja secar. Observarás líneas de delimitación y franjas de varios colores. Las bandas color verde corresponden a clorofila. Las bandas amarillas corresponden a xantofila. Las bandas color púrpura o azul corresponden a antocianina. Las bandas naranja, o incluso marrón, corresponden a carotenoides. 

    A la izquierda tenemos mi vaso #1, donde se puede observar clorofila (abajo), xantofila (línea amarilla en el centro) y carotenoides (marrón arriba). En la cromatografía de mi hoja violeta, localizada en el centro, había mayor concentración de antocianina, por lo que luce púrpura y es difícil discernir otros pigmentos. En la cromatografía #3, donde utilicé una hoja multicolores, se puede observar antocianina (abajo), clorofila (centro), xantofila (centro amarillo) y carotenoides (arriba). ¡Cuán colorido! Espero que hayas disfrutado realizar esta cromatografía tan bonita. Sin las plantas la vida no sería posible y nos dan mucho más que la protección que les brindamos. La fotosíntesis es increíble y si no fuese por los pigmentos, no se podría realizar. ¿Para qué la planta quiere producir su propio alimento, azúcares? Eso te lo explicaré en la próxima entrada. ¡Hasta entonces!